實時熒光定量PCR注意事項

　　1.按照正確的開關(guān)機順序操作,有助于延長儀器的使用壽命,減少儀器出故障的頻率.開機順序：先開電腦,待電腦*啟動后再開啟定量PCR儀主機,等主機面板上的綠燈亮后即可打開定量PCR的收集軟件,進行實驗.關(guān)機順序：確認實驗已經(jīng)結(jié)束后,首先關(guān)閉信號收集軟件,然后關(guān)掉定量PCR儀主機的電源,關(guān)閉電腦.

　　2.應(yīng)該定期備份您的實驗數(shù)據(jù),備份頻率推薦每周一次,用光盤刻錄.同時您也應(yīng)該備份定量PCR儀的各種純熒光光譜校正文件、背景文件和安裝驗證實驗數(shù)據(jù),這些文件所在的目錄是C：/Appliedbiosystems/SDSDocument.

　　3.良好的實驗室環(huán)境有助于延長儀器的使用壽命,減少儀器出故障的頻率.推薦做到以下幾個方面：

　　電源：推薦配備合適的UPS或穩(wěn)壓器.

　　通風(fēng)：儀器的通風(fēng)應(yīng)該沒有阻擋.

　　溫度：推薦實驗室配備空調(diào),溫度應(yīng)該控制在10-30°C之間.

　　濕度：20-80%；對于潮濕的省份,推薦實驗室配備除濕機.

　　空間：易于操作,安全.

　　4.怎樣判斷定量PCR儀的樣本加熱塊是否被污染?怎樣清除污染

　　一個辦法是運行背景校正反應(yīng)板,當(dāng)一個或多個反應(yīng)孔連續(xù)顯示出不正常的高信號,則表明該孔可能被熒光污染物.另外一種辦法是在不放任何物品到樣本塊上的前提下,執(zhí)行ROI的校正,當(dāng)某個孔的信號明顯高出其他孔時,則表明該孔被污染.

　　清除樣本加熱塊污染的步驟如下：用移液器吸取少量乙醇并滴入每個污染的反應(yīng)孔中.吹打數(shù)次.將廢液吸入廢液杯中.重復(fù)以上步驟：乙醇三次,去離子水三次.確認反應(yīng)孔中的殘留液體蒸發(fā)完.